Western Blot

Western印迹法（Western Blot）或称免疫印迹法，常用于科研领域。利用抗体能够特异性结合对应抗原的原理来对样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。

原理

Western 印迹法一般先通过PAGE分离蛋白质样品，再转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜）上，固相载体以非共价形式吸附蛋白质。使用合适的封闭剂封闭固相载体上的空余位置，再使用特异性结合目标蛋白的抗体（一抗）孵育，洗去多余一抗后用标记二抗标记、显色，达到检测经电泳分离的目标蛋白成分。其中标记二抗的方法主要有放射性标记、酶联标记以及荧光标记。

QD-Western

量子点作为新型荧光纳米材料，具有荧光效率高、稳定性高、Stockes位移较大、发射光谱窄而对称、单一波长多色激发等诸多优秀的荧光特性。使用量子点荧光标记产品进行Western印迹实验（QD-Western），相比于ECL方法或普通荧光染料染色，无需显色操作便可轻松实现多元检测，简化操作，提高了检测灵敏度。当使用红色量子点标记二抗时可使用普通凝胶成像仪（常用于观察DNA溴化乙锭染色）直接成像记录，更易于实现高灵敏、定量Western印迹检测。多色检测时350nnm~450nm波长的紫外灯均可有效激发，使用滤光片或直接使用彩色摄像头拍摄。

QD-Western印迹实例：

图1，A蛋白的QD-Western印迹。 点样顺序左起：大肠杆菌裂菌液、酵母表达上清液、目标A蛋白、表达目标A蛋白的大肠杆菌裂菌液、蛋白Marker，以及1、0.5、0.1、0.02μg的目标A蛋白。上图为考马斯亮蓝染色的PAGE照片（使用普通凝胶成像仪，白光模式），下图为相应鼠单抗和QD标记的羊抗鼠二抗（Cat: Q2104/ Q2104a）显色的结果（使用数码相机，加装红色滤光片）。 结果显示QD-Western对大肠杆菌裂菌液和酵母表达上清液都没有非特异性，特异性检测目标A蛋白。

图2，几种蛋白的QD-Western印迹。 对编号NPT、HPT、Cry1Ab、Bar、PCT共5种蛋白进行了QD-Western测试，采用在大肠杆菌裂菌液中混入梯度稀释的标准品进行检测，浓度梯度标注于图上，其中PCT（Cat: ATH301）的梯度与其它4种蛋白稍有不同。 Protein A-QD：使用红色的Protein A-QD625（Cat: Q1205/Q1205a）或绿色的Protein A-QD525（Cat: Q1201/Q1201a）显色，一抗为兔多抗，二抗为羊抗鼠（Cat: AM01/AM01a/AM01b）。SA-QD：使用亲和素-QD605（Cat: Q1104/Q1104a）显色，一抗为兔多抗，二抗为生物素化羊抗鼠（Cat: B-AM01/B-AM01a）。GAM-QD：使用QD605标记羊抗鼠（Cat: Q2104/ Q2104a）为二抗进行显色，一抗为兔多抗或抗PCT鼠单抗。

相关产品：

系列量子点标记物

量子点标记试剂盒
定制标记服务
Goat Anti-Mouse IgG-QD605 Cat: Q2104/ Q2104a
Protein A-QD625 Cat: Q1205/Q1205a
Protein A-QD525 Cat: Q1201/Q1201a
Streptavidin-QD605 Cat: Q1104/Q1104a
Goat Anti-Mouse IgG-Biotin Cat: B-AM01/B-AM01a
Goat Anti-Mouse IgG Cat: AM01/AM01a/AM01b
降钙素原（PCT） Cat: ATH301