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荧光显微成像

显微镜是生命科学研究领域中一个重要的工具,而放大倍率和分辨率是显微镜的重要指标。一般来说,放大倍率越大,分辨率会更高,但普通的亮场显微镜由于样品中不同组分之间的差异较小,因此大放大倍率下,分辨率不会明显提高,必须通过特定的染色方法进行观察(图1)。通过合适的激发光源和滤光系统配合,荧光显微镜可以达到光学显微镜的分辨率极限。

图1,亮场显微镜(左)与荧光显微镜对相同样本的观察结果比较。

量子点标记探针

通过使用荧光探针,包括免疫荧光探针如量子点-抗体偶联产物或核酸荧光探针如量子点-寡聚脱氧核酸偶联产物,基于抗原-抗体特异性结合或核酸序列互补原理,标记细胞表面或内部的目标物质。然后使用荧光显微镜,使用特定波长激发荧光物质显色,以获得目标物质在细胞微观环境中的分布情况。传统的荧光染料,由于激发波长不同以及发射波半峰宽较大易相互干扰,因此一般需要一组滤镜滤色拍摄多张图片再进行叠加,同时检测的目标物质数量也受到局限。同时一般的荧光染料,其光稳定性差,易产生光漂白,进行活细胞染色时长时间或多次动态观察比较困难。而量子点由于优异的多色激发和耐光漂白特性,应用不同色彩的量子点可用一个波长激发出多种不同波长且峰宽窄而对称的荧光,不仅简化了荧光显微镜的设计制造成本,同时丰富了多元分析体系,并且长时间激发荧光衰减很小,动态观察的可比性很强。


量子点显微成像实例:

 


图2,羊抗鼠-QD605(左图,Cat: Q2104/Q2104a)和亲和素-QD605(右图,Cat: 1104/Q1104a)通过抗微管蛋白一抗对细胞骨架的免疫荧光染色显微照片。



 

图3,MC3T3-E1细胞p-Smad1/5(1:40)蛋白(红色,羊抗鼠QD605,Cat: Q2104/Q2104a)和核(蓝色,DAPI)的免疫荧光染色显微照片及叠加合成


图4,MDA-MB-231细胞分别转染5nm QD605-let7a(核酸量子点探针,定制产品,上排图示)和100nm Cy3标记let7a(下排图示)的活细胞荧光染色照片。


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