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量子点标记技术实现分子马达在活细胞的示踪

基于量子点的单分子荧光示踪技术,对于体外研究分子马达在细胞骨架上的行走模式具有重要意义。目前对于细胞内分子马达运动特性的研究,是通过对内吞体、黑素体等细胞器的示踪而间接实现的。这些细胞器通过分子马达运输,因此,对细胞器的运动监测可间接分析分子马达的运动特性。巴黎第六大学Giovanni Cappello课题组,利用量子点标记肌球蛋白(Myosin V)并递送入细胞内,在单细胞水平、以高时间和高空间分辨率记录了肌球蛋白在微丝骨架上的运动特性。

Paolo Pierobon等纯化钙调蛋白并进行生物素处理,生物素化的钙调蛋白可吸附于肌球蛋白,进而通过生物素-亲合素的结合特性,与链霉亲合素偶联的量子点(Streptavidin conjugated Quantum Dots, SA-QDs)结合,从而实现量子点对肌球蛋白的标记(图1)。对于量子点标记的肌球蛋白,体外实验证实量子点没有对肌球蛋白活性造成影响,进而通过渗透压的改变递送入Hela细胞内,利用宽场落射荧光显微镜采集图像(图2),通过程序分析,获得肌球蛋白的步进速度、步距、驻留时间以及累进距离等参数,从而填补了活细胞内对马达分子进行在体研究的空白。


图1 肌球蛋白在微丝骨架上的步进模式图。

一个量子点(QD)偶联于肌球蛋白的一个IQ结构域。



图2 肌球蛋白在Hela细胞内沿微丝骨架运动的示踪与分析

(A) 量子点标记肌球蛋白(红色亮点)均匀分布于细胞内,微丝骨架由Alexa Fluor 488标记的鬼笔环肽染为绿色。(B) 量子点标记肌球蛋白(银灰色亮点)沿着微丝骨架(绿色)定向运动。(C) 量子点标记肌球蛋白(银灰色亮点)在细胞浆内随机扩散。


文献来源:

Pierobon P, Achouri S, Courty S, Dunn AR, Spudich JA, Dahan M, Cappello G. Velocity, processivity, and individual steps of single myosin V molecules in live cells. Biophys J. 2009;96(10):4268-75.




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